Objetivo. Hacer una preparación microscópica de células meristemáticas de la raíz de cebolla
Materiales:
- Ápices de cebolla.
- HCl diluido.
- Colorante aceto - orceína.
- Portaobjetos.
- Cubreobjetos.
- Papel toalla
- Aguja de disección.
Introducción
La división celular es el fenómeno citológico por el que una célula origina dos células hijas, cada una de las cuales recibe idéntica información genética.
Dentro de las funciones que realiza la célula eucarionte, dos de las más importantes: la regulación y la reproducción celular descansan en el núcleo.
El núcleo contiene la mayor parte de la información hereditaria de la célula, es decir, las instrucciones necesarias para el desarrollo y el metabolismo de las especies. Este organélo es el encargado de duplicar su información genética para transmitirla a las nuevas generaciones cuando la célula se reproduzca.
Los procesos que se manifiestan desde la formación de una célula hasta su propia división en dos hijas, son lo que se denomina ciclo celular. Este ciclo se divide en dos etapas principales: la interfase y la división celular, de acuerdo con los sucesos que se presentan en la célula. La interfase se caracteriza por una serie de procesos que implican la fabricación activa de moléculas tales como las proteínas y la duplicación del DNA. Mientras que la división celular consta de la mitosis o cariocinesis en la que ocurre la condensación y separación de los cromosomas y de la citocinesis o división citoplásmica. La mitosis se subdivide según los cambios que presente el núcleo y la morfología que presenten los cromosomas en: profase, metafase, anafase y telofase.
El significado biológico de la mitosis es asegurar la conservación del patrimonio hereditario nuclear en el proceso de formación de un individuo adulto a partir de una célula inicial o cigoto.
Preparación previa. Tres o cuatro días antes de hacer la práctica se pone un bulbo de cebolla en un vaso de precipitados lleno de agua, de tal manera que la parte inferior del mismo esté en contacto con el agua. no permita que la cebolla caiga dentro del recipiente sino que quede suspendida sobre el agua (si es necesario, inserte unos palillos de dientes en los lados de la cebolla para que la sostengan).
Preparación previa. Tres o cuatro días antes de hacer la práctica se pone un bulbo de cebolla en un vaso de precipitados lleno de agua, de tal manera que la parte inferior del mismo esté en contacto con el agua. no permita que la cebolla caiga dentro del recipiente sino que quede suspendida sobre el agua (si es necesario, inserte unos palillos de dientes en los lados de la cebolla para que la sostengan).Al cabo de esos tres o cuatro días se habrán formado numerosas raicillas, cuyos ápices se utilizarán en esta práctica. Conviene realizar la práctica cuando las raicillas todavía no han crecido demasiado. Se debe cambiar el agua del frasco por agua limpia, al menos dos veces, a los 3 y 4 días. La raíz de la cebolla debe de estar sumergida en agua hasta el momento de realizar la práctica
Procedimiento:
1. Con una tijera se corta el extremo de varias raicillas, procurando que su longitud sea de unos 2 a 3 mm., ya que es en esta zona de la raíz donde se encuentran las células en división.
2. Enjuague los ápices de cebolla (fijados) en agua destilada por 30 segundos.
3. Coloque las raíces en un plato Petri que contenga unos 3mL de HCl 1% por 7-8 min. (esto se hace para romper la pared celular).
4. Mientras transcurre el tiempo anterior, corte y conserve la porción del ápice de raíz que posea un tejido blanquecino (casi 2-3 mm del extremo de la raíz) y deseche el resto.
5. Transferir los ápices a agua destilada y dejarlos allí 30 segundos (enjuague).
6. Coloque el tejido sobre un portaobjetos e inmediatamente agregue dos gotas de aceto-orceína sobre éste.
7. Coloque un cubreobjetos sobre el tejido y caliente la muestra suavemente por 1 minuto, por medio de toques intermitentes sobre la superficie de un plato de calentamiento o "hot plate" (durante este tiempo vigile que el tejido permanece humedecido con el colorante, no permita que hierva ni que se seque; agregue más colorante si es necesario). Esta etapa es opcional (el calentamiento intensifica la tinción).
8. Coloque un trozo de papel toalla sobre el cubreobjetos; presione fuerte y cuidadosamente por medio de un borrador de lápiz (esta técnica se llama "extendido por aplastamiento" o "squach”). Recuerde que mientras esté más aplastado, las células se separarán más unas de las otras y se encontrarán en el mismo plano, distinguiéndose mejor las distintas etapas de mitosis.
9. Después del aplastamiento, si es necesario, levante el cubreobjetos con la ayuda de una aguja de disección y agregue una gota adicional de aceto-orceína; coloque nuevamente el cubreobjetos sobre la muestra.
10. Observe al microscopio (primero con el objetivo 10x localice el área adecuada, luego pase a 40x para observar con detalles).
11. Encuentre las cuatro etapas de la mitosis, además observe la apariencia de las células que se encuentran en interface (aquellas que no están en mitosis). Realiza un conteo de campo.
RESULTADOS
ANÁLISIS DE RESULTADOS
1. Describe las etapas del ciclo celular.
3. Explica en que etapa del ciclo celular se encontraban la mayoría de las células observadas.
La mayoría de las células se encontró en la Telofase.
4. ¿Que etapas de la mitosis lograste observar?
Se logro observar la anafase
5. ¿Por qué crees que se utilicen las partes en crecimiento de la cebolla para observar la mitosis?
la acetorceina es un colorante básico, y por lo tanto tiene afinidad por los componentes ácidos.
CONCLUSIONES
Si se cumplieron los objetos porque se pudo observar etapas de célula en las ápices de la cebolla, lo mas importante se pudo ver lo que se quería en el experimento.
Bibliografía:
Avers, Charlotte. Biología Celular.
De Robertis & De Robertis. Biología Celular y Molecular.
RESULTADOS
Profase
Profase- Metafase
Metafase- Anafase
 |
| Telofase |
ANÁLISIS DE RESULTADOS
1. Describe las etapas del ciclo celular.
· Profase
· Metafase
· Anafase
· Telofase
2. Explica las características de la mitosis.· proceso característico de células diploides, que van a producir nuevas células diploides.
· Se presenta en células vegetales y animales
· Se produce una duplicación cromosómica y una división nuclear y citoplasmática en cada ciclo.
· En cada ciclo se produce dos células hijas.
· Cada una de las células hijas contiene el mismo número de cromosomas que posee la célula madre.
3. Explica en que etapa del ciclo celular se encontraban la mayoría de las células observadas.
La mayoría de las células se encontró en la Telofase.
4. ¿Que etapas de la mitosis lograste observar?
Se logro observar la anafase
5. ¿Por qué crees que se utilicen las partes en crecimiento de la cebolla para observar la mitosis?
En un corte fino, tincionado correctamente, se puede observar este proceso ya que por la presencia de pared celular, matriz intracelular y el núcleo, que en las células de raíz es, relativamente grande, se puede observar mejor este proceso.
6. ¿Para qué se utiliza la acetorceína, que función cumple en la preparación?
la acetorceina es un colorante básico, y por lo tanto tiene afinidad por los componentes ácidos.
CONCLUSIONES
Si se cumplieron los objetos porque se pudo observar etapas de célula en las ápices de la cebolla, lo mas importante se pudo ver lo que se quería en el experimento.
Bibliografía:
Avers, Charlotte. Biología Celular.
De Robertis & De Robertis. Biología Celular y Molecular.
